2 DMN（二甲基亞硝胺）誘導(dǎo)C57小鼠肝纖維化模型建立

2.1 原理  

二甲基亞硝胺（DMN）通過肝臟代謝生成甲基自由基，直接損傷肝細胞及肝竇內(nèi)皮細胞，激活炎癥反應(yīng)（TNF-α、IL-6釋放）和肝星狀細胞（HSC）活化，促進膠原蛋白（Ⅰ/Ⅲ型）異常沉積，最終形成肝纖維化。其機制不依賴致癌性基因突變，而通過氧化應(yīng)激與ECM代謝失衡驅(qū)動纖維化進程。

2.2 實驗步驟  

2.2.1 動物準備

• 品系選擇：雄性C57BL/6J小鼠（6-8周齡），雄性對DMN肝毒性更敏感。

• 環(huán)境適應(yīng)：SPF級環(huán)境中適應(yīng)1周，自由攝食飲水，維持12小時光/暗周期。

2.2.2 DMN給藥方案

纖維化誘導(dǎo)方案：

• 劑量：DMN 1mg/ml（溶于生理鹽水，避光保存，現(xiàn)用現(xiàn)配）。  

• 注射方式：每日固定時間1次腹腔注射，每周隔天注射共3天，隨后停藥4天（每周為1個循環(huán)）。  

• 總周期：4周（共12次注射）。  

關(guān)鍵注意：

• 注射時避免漏液（易致腹膜炎癥）。

• 每周監(jiān)測體重，存活率需＞80%（劑量過高易致死）。  

2.2.3 實驗周期

• 急性損傷期：注射后1-2周，肝細胞壞死與炎癥浸潤顯著。

• 纖維化形成期：注射后3-4周，門靜脈周圍膠原沉積，橋接纖維間隔形成。

2.3 模型驗證方法  

2.3.1 生化指標檢測

• 血清肝功能：ALT、AST水平升高2-3倍（ELISA法）。

• 肝纖維化標志物：羥脯氨酸（Hyp）含量增加＞50%（比色法）。

2.3.2 病理學(xué)分析

1. 大體觀察：肝臟表面粗糙，可見灰白色纖維條索（圖1）。

2. 組織切片：

• H&E染色：肝細胞壞死、炎性細胞浸潤及纖維間隔形成。

• 天狼星紅染色：膠原沉積面積定量（紅色區(qū)域占比≥15%）。

• 免疫組化：α-SMA（活化的HSC標志物）陽性率＞30%。

2.3.3 分子標志物檢測

• Western blot：TGF-β、CollagenⅠ蛋白表達顯著上調(diào)。

• qPCR：MMP-2/9下調(diào)，TIMP-1上調(diào)，提示ECM降解受阻。

總結(jié)

DMN通過氧化損傷→炎癥→HSC活化→膠原沉積的級聯(lián)反應(yīng)誘導(dǎo)肝纖維化，模型穩(wěn)定且重復(fù)性高，需結(jié)合多維度指標（生化、病理、分子）驗證，適用于抗纖維化機制與藥物研究

2.4 關(guān)鍵注意事項

2.4.1 劑量控制

DMN劑量>15 mg/kg可能導(dǎo)致急性肝壞死（圖二），<5 mg/kg則肝損傷發(fā)生率低。

2.4.2 品系與性別差異

• C57BL/6J小鼠對DMN敏感性低于其他品系（如B6C3F1），需延長誘導(dǎo)周期。  

• 雌性小鼠因雌激素保護作用，肝纖維化發(fā)生率顯著低于雄性。  

2.4.3 倫理與動物福利

• 每周監(jiān)測體重、活動度及毛發(fā)狀態(tài)。  

• 肝損傷體積>2000 mm3或體重下降≥20%時，使其優(yōu)逝。

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)?？梢栽诘谝粫r間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務(wù)